一、体内实验证实：ALI/ARDS 存在铁死亡，且与 Sesn2 密切相关
研究团队利用 C57BL/6 野生型小鼠及 Sesn2 敲除小鼠构建 CLP 诱导 ALI/ARDS 模型，发现模型小鼠肺组织中 Sesn2 表达显著升高，而铁死亡关键指标呈现特征性变化：铁死亡抑制蛋白 GPX4、Ferritin、FTH1 表达下调，促铁死亡蛋白 ACSL4、TFR1 表达上调（p<0.05）。生化检测显示，模型小鼠肺组织中抗氧化剂 GSH 显著耗竭，脂质过氧化产物 MDA 及 Fe²⁺水平大幅升高（p<0.0001），透射电子显微镜观察到线粒体萎缩、嵴减少、膜密度增加等典型铁死亡形态学特征。
进一步使用铁死亡抑制剂 Lip-1 干预后，上述铁死亡指标及肺组织炎性损伤（出血、肺泡隔增厚、炎性细胞浸润）均显著缓解；而 Sesn2 敲除小鼠的铁死亡程度及肺损伤更为严重，Lip-1 干预可部分逆转该表型，证实 Sesn2 与 ALI/ARDS 中的铁死亡进程密切相关，且具有内源性保护作用。
二、体外实验验证：LPS 诱导 AEC-II 铁死亡，Sesn2 呈代偿性高表达
为明确细胞层面机制，研究团队以 MLE-12 肺泡上皮细胞为研究对象，建立 LPS 诱导 ALI 体外模型，确定 1μg/mL LPS 处理 24 小时为最佳实验条件。结果显示，LPS 诱导后 MLE-12 细胞存活率显著下降，同时伴随 Sesn2 表达代偿性升高，铁死亡相关指标呈现与体内实验一致的变化：GSH 降低、MDA 及 Fe²⁺升高（p<0.01），流式细胞术及免疫荧光检测证实细胞内脂质 ROS 生成增加（p<0.0001）。
Lip-1 干预可有效恢复 LPS 诱导的细胞活力下降，抑制脂质过氧化及 Fe²⁺积累，且不影响 Sesn2 的表达水平，提示 Sesn2 与铁死亡抑制剂可能通过不同途径发挥保护作用，进一步佐证铁死亡在 AEC-II 损伤中的核心地位。
三、Sesn2 负调控 AEC-II 铁死亡，发挥 ALI 保护作用
通过构建 Sesn2 干扰 RNA 及过表达质粒转染 MLE-12 细胞，研究团队证实 Sesn2 对铁死亡的负向调控作用：Sesn2 过表达可显著逆转 LPS 诱导的细胞存活率降低（p<0.05），抑制 MDA 及 Fe²⁺积累，提升 GSH 水平，同时上调 GPX4、FTH1、Ferritin 等铁死亡抑制蛋白表达，下调 ACSL4、TFR1 等促铁死亡蛋白表达；反之，Sesn2 沉默则会加剧 LPS 诱导的铁死亡及细胞损伤（p<0.0001），免疫荧光及流式检测显示细胞内 ROS 水平显著升高，证实 Sesn2 通过抗氧化、抑制铁死亡发挥 AEC-II 保护作用。
四、分子机制阐明：Sesn2 通过 P62-Keap1-Nrf2 通路调控铁死亡
为揭示 Sesn2 发挥作用的核心通路，研究团队通过 Co-IP 实验证实 Sesn2 与 P62-Keap1-Nrf2 通路相关蛋白存在相互作用。进一步实验发现，LPS 诱导后 MLE-12 细胞中 P62 表达下调，Nrf2 表达上调；Sesn2 沉默会导致 P62 水平进一步降低，而 Sesn2 过表达可激活 P62-Keap1-Nrf2 通路，促进 Nrf2 核转录活性。
沉默 P62 后，LPS 诱导的 MLE-12 细胞存活率显著下降，GSH 含量降低、MDA 及 Fe²⁺升高，GPX4 表达受抑，ROS 生成增加（p<0.01），模拟了 Sesn2 沉默的表型。上述结果证实，P62 是 Sesn2 调控铁死亡的关键下游分子，Sesn2 通过激活 P62-Keap1-Nrf2 信号通路，增强细胞抗氧化能力，进而抑制 AEC-II 铁死亡，减轻急性肺损伤。
