
CmCRC基因影响甜瓜性别分化的功能研究
袁梦博,赵光伟,贺玉花,黄祥,徐永阳,张健,孔维虎,田小琴,户克云,唐伶俐
DOI:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2026-0068
性别分化受遗传、激素及环境等多重因素共同调控。模式植物与园艺作物的相关研究为解析这一过程提供了重要线索。拟南芥作为两性花植物,其性别决定本质是对花器官发育的精确调控。基于AGAMOUS(AG)等MADS-box转录因子的ABC模型阐明了花器官身份决定的分子基础,其中C类基因AG的激活是心皮和雄蕊发育的关键,功能缺失可致雌、雄蕊完全败育。番茄为雌雄同花作物,其性别决定主要涉及雄蕊发育调控,研究发现SlIAA9基因通过影响生长素信号通路调控雄蕊育性,SlWUS基因的梯度表达则决定雌蕊原基形成。黄瓜是葫芦科性别决定研究的模式作物,已鉴定出F、M、A等核心调控基因,形成“基因互作‒激素调控”的经典模型,F基因(CsACS1G)促进雌花分化,M基因(CsACS2)维持雄蕊发育,A基因抑制雌花形成,三者互作决定了黄瓜雌雄同株、全雌株等性型。
CRABS CLAW(CRC)属于YABBY转录因子家族,N端含C2H2锌指结构域、C端的YABBY结构域,在陆生植物中广泛存在且功能保守。CRC最早在拟南芥中被证实是花器官发育的关键调控因子,通过调控生长素与细胞分裂素平衡维持育性,并参与果实成熟及离区形成过程。单子叶植物中,水稻OsCRC基因(即DROOPING LEAF)调控雌蕊发育与花对称性建立,玉米ZmCRC参与胚珠形态建成,体现功能进化多样性。近年来在葫芦科作物中的研究拓展了CRC的功能。黄瓜中,CsCRC关联基因网络共同调控果实伸长,揭示其在性别决定与果实发育中的核心作用。
甜瓜(Cucumis melo L.)为葫芦科重要经济作物,性型多样(雌雄异花同株、雄全同株、全雌株等),核心调控机制由A、G两大基因主导。A基因(CmACS7)诱导雄蕊退化促进雌花形成,G基因(CmWIP1)抑制心皮发育决定雄花身份,二者互作构成调控框架。其中,A基因存在且G基因缺失为雌雄同株,G基因存在无论A基因存在与否均为雄全同株。CRC作为植物花器官发育的关键调控因子,在性别分化调控网络中发挥重要作用,其功能实现与G基因的调控直接关联,并间接影响A基因介导的性别决定。
近日,中国农业科学院郑州果树研究所赵光伟团队在《生物技术通报》发表了题为《CmCRC基因影响甜瓜性别分化的功能研究》的文章。本研究利用CRISPR-Cas9技术构建CmCRC突变体,通过表型观察和分子分析,验证CmCRC对甜瓜花器官性别分化的调控作用,这既深化了对植物性别决定机制的认识,也为甜瓜杂交制种创制全雄株父本材料提供理论支撑。
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1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 CmCRC组织特异性表达分析
2.2 CmCRC基因敲除及突变体表型分析
2.3 CmCRC基因编辑T1代植株表型分析
3 讨论
4 结论







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本研究通过多组学表达分析与CRISPR/Cas9基因编辑技术,系统探究了甜瓜CmCRC基因的生物学功能。表达模式分析表明,CmCRC在雌花中显著高表达,同时在茎尖分生组织活跃表达,暗示其具有多效性调控功能;通过CRISPR/Cas9技术成功构建了CmCRC突变体,发现其功能缺失会导致植株丧失两性花分化能力、仅产生雄花,且引发茎尖分生组织发育迟缓及生殖受阻后的营养生长补偿效应。这一结果表明CmCRC是甜瓜两性花发育与性别决定的关键调控因子,其功能可能位于甜瓜性别决定通路的下游关键节点。甜瓜制种多为母本和父本材料杂交,制种过程常存在父本不足以为母本授粉的情况,产生全雄株系可提高花粉采集花朵数量,这一研究为甜瓜杂交制种创制全雄株父本材料提供重要理论支撑。
目前,CRC基因的功能研究主要集中于拟南芥、番茄等模式植物及豌豆、三叶木通等作物,这些研究与本研究有相似之处,也有明显不同。黄瓜CsARF3等基因通过激素信号调控雌花形成,其突变体也表现为全雄花,但不会影响茎尖分生组织的活性,与本研究CmCRC功能相一致,说明了该基因调控植物性别分化的保守性。本研究针对甜瓜CmCRC基因开展研究,通过对T0和T1两代的突变体材料表型进行验证,明确了该基因对性别决定的保守功能,该基因除参与调控两性花发育外,在调控茎尖分生组织活性、营养生长与生殖生长的平衡中存在物种特异性。此外,通过全生育期的表型观察发现,CmCRC功能缺失引发的营养生长补偿效应,为后续研究植物生长发育的协同调控机制提供了新的方向。
本研究未深入解析CmCRC基因调控两性花发育及茎尖分生组织活性的分子机制,其下游作用靶基因、与激素信号通路的互作关系尚未明确,故难以确定该基因在甜瓜性别决定通路中的确切位置。其次,同类研究多结合ChIP-seq、酵母双杂交等技术解析基因互作网络,而本研究仅基于表达量与表型的关联分析验证基因功能,缺乏蛋白水平及调控通路层面的直接证据,研究不够深入。第三,CmCRC基因在甜瓜茎尖显著高表达,但关于其影响茎尖的发育机制研究尚不充分,相关激素变化与表型之间的关联也尚未阐明,这也为后续该基因详细功能机制探究提供了思路。总体而言,本研究填补了甜瓜CmCRC基因功能研究的空白,存在一定局限性,但为后续甜瓜性别决定机制的解析及分子育种改良提供了重要参考。
通过基因编辑甜瓜CmCRC基因获得突变体株系。突变体营养生长正常,但生殖生长呈全雄株表型,不形成两性花,无法结实。未发生编辑的T0代植株(CR-CmCRC-23和CR-CmCRC-48)在T1代出现编辑事件,完全丧失两性花形成能力,仅产生雄花。RT-qPCR结果显示,T1代突变体雄花中CmCRC表达量显著下调,其功能缺失及表达下调是导致甜瓜全雄花表型的主要原因。

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