脑出血治疗新星!郑州大学 薛孟周教授(IF 13):MyD88 抑制肽-2 (MIP2) 可改善脑出血介导的继发性脑损伤后的神经功能预后并减轻神经炎症

背景：脑出血是一种高致死率、高致残率的脑血管疾病，目前缺乏有效的治疗手段。脑出血后激活的神经炎症反应是继发性脑损伤的主要驱动因素，其中Toll样受体介导的MyD88依赖性信号通路在炎症反应中起关键作用。MIP2是一种能够靶向TIR结构域、具有广谱TLR抑制活性的多肽，但其在脑出血中的作用机制尚不明确。

目的：探讨MIP2在脑出血后继发性脑损伤中的神经保护、抗炎及抗氧化应激作用，揭示其潜在的作用机制。

方法：

模型构建： 通过向纹状体注射胶原酶诱导小鼠脑出血模型。给药方式： 在造模后第0、1、3天腹腔注射MIP2。

评估手段： 使用神经功能缺损评分和转角实验评估神经行为功能；通过HE染色测量血肿体积；通过Evans Blue assay和紧密连接蛋白检测评估血脑屏障（BBB）完整性；通过TUNEL染色评估凋亡；通过Western Blot、免疫组化和免疫荧光分析相关分子标志物。

结果：

功能改善： MIP2治疗显著改善了神经功能，减少了血肿体积。

BBB保护： MIP2通过上调紧密连接蛋白（ZO-1, Claudin-5, Occludin）并降低MMP9表达，增强了血脑屏障的完整性。

抗炎作用： MIP2通过抑制胶质细胞激活、中性粒细胞浸润以及炎症介质（HO-1, MyD88, NF-κB, TLR4, IL-1β）的表达，减轻了神经炎症。

抗氧化作用： MIP2通过调节MyD88介导的信号通路，增加了抗氧化应激标志物（GPX4, AIFM2, Nrf2）的表达。

结论：MIP2通过调控MyD88介导的信号通路，抑制神经炎症、减轻氧化应激、保护血脑屏障完整性、减少细胞凋亡，从而在脑出血后继发性脑损伤中发挥显著的神经保护作用，具有潜在的临床转化价值。

图1  MIP2改善脑出血后的神经功能严重程度，减轻脑损伤及血肿体积。

(A)(B) 分别通过角落测试(A)和局灶性神经功能缺损评分(B)评估术后第1、3、7天的神经功能评分。(C)(E) 脑出血诱导小鼠脑组织的代表性H&E染色图像(C)及通过H&E染色图像评估的血肿体积(E)。(D)(F) 脑出血术后第3天小鼠脑组织的代表性脑切片图像(D)及大体血肿体积的定量分析(F)。

图2 MIP2治疗改善血脑屏障结构完整性。

(A) 血肿周围脑区标记ZO-1（绿色）和DAPI（蓝色）的免疫荧光染色图像。(B) 伊文思蓝染色的定量分析。(C) 脑出血术后第3天紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin、Claudin-5）及MMP9的代表性Western blot结果。(E–H) ZO-1(E)、Occludin(F)、Claudin-5(G)及MMP9(H)表达的定量分析。(D) 脑出血后血肿周围脑区vWF和MMP9免疫组化染色的代表性图像。(I)(J) vWF(I)和MMP9(J)的定量分析。

图3 MIP2下调脑出血后炎症介质的表达。

(A) Western blot检测HO-1、TLR4、NF-κB及IL-1β的蛋白表达。(B–E) 通过ImageJ和GraphPad Prism软件对HO-1(B)、TLR4(C)、NF-κB(D)和IL-1β(E)进行定量分析。(H) 脑出血术后第3天TLR4和MyD88阳性细胞的免疫组化扫描图像。(F)(G) 通过ImageJ和GraphPad Prism软件对TLR4(F)和MyD88(G)进行定量分析。

图4  MIP2治疗减轻脑出血后炎症反应。

(A–D) 脑出血术后第3天MPO（绿色）、DAPI（蓝色）(A, C)及NeuN（红色）(B, D)的荧光染色及定量分析，通过ImageJ和GraphPad Prism软件分析。(E–H) 脑出血术后第3天Iba-1（红色）(E, G)和GFAP（绿色）(F, H)的荧光染色及定量分析，通过ImageJ和GraphPad Prism软件分析。

图5 MIP2减少脑出血后细胞凋亡。

(A)(D) 脑出血术后第3天血肿周围区域TUNEL阳性细胞的代表性荧光图像及定量分析（TUNEL：绿色，DAPI：蓝色）。(B)(G) 免疫组化染色图像(B)及cleaved caspase-3的定量分析(G)。(C) Western blot检测Bcl-2和BAX的蛋白表达。(E)(F) Bcl-2(E)和BAX(F)的定量分析。

图6 MIP2减轻脑出血后脑损伤并缓解氧化应激损伤。

(A)(C–D) 脑出血术后第3天血肿周围脑区GPX4(A, C)和Nrf2(A, D)的蛋白表达。(B) AIFM2的免疫组化染色图像。(E) AIFM2阳性染色百分比的定量评估，数据通过ImageJ获取并由GraphPad Prism软件分析。(F) 活性氧检测。

图7 脑出血（ICH）的病理机制及MIP2治疗在减轻继发性脑损伤中的治疗效应示意图。

该图展示了MIP2腹腔注射后穿越血脑屏障，通过干扰TIR信号体组装（结合TLR4、MyD88的TIR结构域），抑制NF-κB激活和下游IL-1β释放，进而减少星形胶质细胞、小胶质细胞/巨噬细胞活化、中性粒细胞浸润和MMPs产生；同时激活Nrf2抗氧化通路，上调GPX4、HO-1和AIFM2表达，降低ROS水平，最终保护血脑屏障紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin、Claudin-5、JAM），实现神经保护和功能恢复。